狗狗细小会传染给狗吗?
犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)是一种传染性极强的致病性病毒性肠炎,主要感染幼年犬(尤其2~5月龄)以及未断奶的犬仔,死亡率极高。 目前尚未发现人感染该病毒的病例,但研究发现人类是CPV-2a的潜在宿主,并且可以成为病毒的储存宿主。 2016~2017年期间,在俄罗斯、西班牙和波兰等欧洲多国先后发生人畜共患病爆发流行事件,其中就有CPV疫情。我国也于2018年在江苏省南京市江宁区调查中发现了一例隐性人类感染病例,因此,研究CPV在犬群中的传播方式及人类的感染情况对预防CPV的人畜共患病具有重要的意义。 下面我们看一下实验结果是怎么样的呢?
一、材料与方法 1.1实验动物 9周龄纯种博美犬38只,来自江苏省某宠物医院,分为3组,分别为细小病毒阳性感染组(n=4)、细小病毒阴性感染组(n=13)和健康对照组(n=11);所有犬均以散养式管理,自由采食饮水,单笼饲养,保持室内清洁干燥通风,每周两次对犬舍进行彻底清洗消毒。
1.2主要试剂与仪器 犬细小病毒抗原检测试剂盒购自北京爱德森泰科技有限公司,RT-PCR试剂购自上海之江生物科技股份有限公司,Trizol试剂、MMLV反转录酶、dNTPs、Rnasin、RNA酶抑制剂均购自上海生工生物科技有限公司,DNA凝胶回收试剂盒、质粒小提试剂盒、胶回收试剂盒等均购自杭州奥因生物工程有限公司,PCR引物采用PRIMER 5.0软件自行设计,由上海吉玛制药技术有限公司合成(表1)。核酸提取仪为Eppendorf Mastercycler ep gradient,荧光定量PCR仪为BioRad IQ5,实时荧光定量PCR仪为ABI StepOnePlus。
1.3方法 1.3.1样品采集与健康犬相比,患犬精神沉郁、食欲不振或废绝、体温升高40℃以上、脱水、严重呕吐腹泻等症状,粪便呈黄色至灰白色粘液状水样便,每日排便次数多达数十次;健康犬则粪便呈条状,表面附着黄色或灰色粘液,无腥臭味,且健康状况良好,食欲良好,体温正常[2]。所以本研究中采样对象均为患有细小的病犬,从发病第2天开始每天采集一次血液,采集量约1ml/只;同时采集病犬的腹泻液和粪便,用无菌棉棒轻轻擦拭病犬肛门后收集排出的粪液,置于离心管内,-80℃保存备用。
1.3.2核酸检测 1.3.2.1 RNA提取将粪便或腹泻液样本室温解冻,充分混匀,按照Trizol试剂说明书操作,提取总RNA并用核酸测定仪(Thermo Scientific NanoDrop 2000)测定浓度与纯度(OD260/OD280),并稀释成浓度约为1ng/μl的单链cDNA备用。
1.3.2.2 RT-PCR 以犬细小病毒保守区基因片段(GenBank登录号:KF325674)为靶序列,上游引物序列为:5′GATGGAGGTACTCAGCCTGTAGACC-3′,下游引物序列为:5′CGACTTCTCATCAAGTATTGCGTAAA-3′,扩增长度约为150bp。按以下反应体系进行PCR: MgCl2 (2 mmol/L), dNTP(0.2mmol/L), PRIMERS (10 μmol/L), RNase out (5 U/μL); RT-P C R Buffer, DNase I (1U/μL),Reverse Transcriptase (MMLV) (5 U/μL),RNas Inhibitor (40 U/μL); RT-PCRR Buffer, Forward Primers: Rt-control primers; Reverse Primers: 1× ; DNA template : 0.5ul。 程序如下:
1.3.2.3 PCR产物鉴定 取少量10倍系列稀释的PCR产物,上样于1%琼脂糖凝胶中,以DL2000 DNA marker 为参照进行电泳分析,将阳性产物送公司测序验证。
二、结果 我们来看一下结果如何呢? 图1:RT-PCR反应产物鉴定 从图1可以看出,在1%~10−6倍稀释时,均有特异性条带出现,说明所设计的引物能特异地扩增出目的片段。由于10−6倍的稀释标本没有检测到特异性条带,可能的原因是目的基因的含量太低而造成的,但是PCR产物与预期片段大小相符。 所以我们可以得出结论: 本研究建立的RT-PCR法能够快速特异的检测犬细小病毒感染,可用于临床检测。
三、总结 因为CPV的潜伏期为7到14天左右,所以在治疗过程中要注意观察病情变化,一旦症状加重要及时采取紧急措施进行治疗。在治疗的过程中要禁食禁水,静脉滴注葡萄糖溶液来补充体力,必要时可注射生理盐水。如果患犬出现剧烈呕吐症状要及时给予止吐药物,若患犬呕吐频繁应禁食禁饮4小时以便利于患犬肠胃恢复消化能力。 在使用抗生素前要对病犬进行检查确诊,防止误诊现象的发生影响治疗效果。对于已经出现腹泻症状的患犬要采取相应的止泻手段,如服用止泻药蒙脱石散。当患犬